本发明公开了一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法,配方为:250ml乙醇,75ml冰乙酸,纯水定容到一种sds-page电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法
本发明公开了一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法,配方为:250ml乙醇,75ml冰乙酸,纯水定容到1000ml。方法为:取适量上述脱色液,将胶浸没后,在微波炉内低火模式下加热1min,再静置15min后,更换脱色液,重复以上步骤两次就能够实现脱色,整个脱色时间1h内就能够实现。新的脱色液配方降低了乙醇和冰醋酸在整个脱色液中的比例,降低了成本。配合快速脱色方法,可以在1h内就完成整个脱色过程,方便快捷。操作简单便捷,不要特殊设备。
[0001] 本发明属于电泳凝胶脱色技术,具体涉及了 SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方与快速脱色方法。
[0002]聚丙烯酸***凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis, SDS-PAGE)已成为现代生物学研究中重要的技术方法,是对蛋白质进行纯度及含量鉴定的一种经济、快速、可重复的方法。SDS-PAGE电泳基础原理是在聚丙烯酰***凝胶系统中,加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS),SDS是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开,并结合到蛋白质分子上,使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷,其数量远超于了蛋白质分子原有的电荷量,从而掩盖了不一样的种类蛋白质间原有的电荷差别。此时,蛋白质分子的电泳迁移率主要根据它的分子量大小,而其它因素对电泳迁移率的影响几乎能忽略不计。SDS-PAGE电泳易于操作,用途广泛,它已成为许多研究领域中一种重要的分析技术。SDS-PAGE包括四个主要步骤,即:凝胶制备、电泳、染色、脱色。其中凝胶制备和电泳已有成熟的技术和专用设备,目前SDS-PAGE的凝胶染色主要方法有考马斯亮蓝染色和银染等,其中考马斯亮蓝染色应用最为广泛。然而考马斯亮蓝染色后需进行脱色,将聚丙烯酰***凝胶上非特异性结合的考马斯亮蓝脱掉后,才能显示出清晰的电泳条带。正常的情况下凝胶脱色需要用醋酸-甲醇或醋酸-乙醇脱色液在脱色摇床上至少脱色3 h,不能及时看到实验结果。
[0003]本发明目的是为了提供一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方与快速脱色方法。
一种SDS- PAGE电泳凝胶脱色液的配方,每1000 ml所述的脱色液中含有下述原料:乙醇240~260 ml、冰乙酸70~80 ml,剩余的为去离子水。
(2)第一次脱色:用上述配方的脱色液将胶浸没后,在微波炉内低火模式下加热1~,静置13~16min后,将脱色液倒出
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